干貨│Transwell 總失敗,是哪個環節出了 問題？ 
                                                                 作者：毛博 
Transwell 技術在細胞共培養、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲中經常被應用到，相對來說， 它的操作還是較簡單，重復性也比較好，可還是有小伙伴叫苦不迭：為啥我總是失敗呢？毛
博今天就來幫你對癥下藥，一一梳理，看看是哪出了問題。  
  
“杯子”孔徑用對了嗎？ 
Transwell 技術的名稱來自于就是一個叫 Transwell 的小杯子，可以放在細胞培養板里面。有 不同形狀，不同大小，不同選擇。但無論如何，它的關鍵部分都是一樣的，那就是杯子底層
的那張膜。這張膜一般是聚碳酸酯膜，帶有微孔，孔徑大小有 0.1－12.0 µm。根據不同的實 驗需要，需要選用不同的孔徑，共培養、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究， 應用的孔徑是有區別的。 
 

(1).細胞共培養： 
 
將細胞 A 種于上室，細胞 B 種于下室，可以研究細胞 B 分泌或代謝產生的物質對細胞 A 的 影響。應選擇﹤3.0 µm 孔徑。因為﹤3.0 µm 孔徑，細胞不會遷徙通過。 
 
(2).細胞趨化: 
 
①細胞 B 對細胞 A 的趨化作用：將細胞 A 種于上室，細胞 B 種于下室，可以研究細胞 B 分 泌或代謝產生的物質對細胞 A 的趨化作用。 
 
②趨化因子對細胞的趨化作用：將細胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化 因子對細胞的趨化作用。 
應選擇 5.0、8.0、12.0 µm 孔徑，上室細胞可穿過膜進入下室，計數進入下室的細胞量可反 映下室成分對上室細胞的趨化能力。 
 
(3).細胞遷移: 
 
上室種細胞，一般是具備遷移能力的腫瘤細胞，下室加入 FBS 或某些特定的趨化因子，腫瘤 細胞會向營養成分高的下室跑。應選擇 8.0、12.0 µm 孔徑，計數進入下室的細胞量可反映細 胞的遷移能力。 

(4).細胞侵襲： 
 
常用 8.0、12.0 µm 孔徑，原理和方法與細胞遷移實驗類似。 

檢查過程細節小紕漏 
 
① 重復使用的問題： 
 
Transwell 小室按照要求，都是一次性使用的。不過因為價格昂貴，其實洗洗泡泡還是可以重 復用的。用完后用胰酶和 75%酒精泡，室溫涼干。再次使用前用紫外里里外外都照上 30 min。 就可以啦。 
 
② 上層培養液： 
 
上層培養液采用無血清培養基，為維持滲透壓，需加入 0.05%-0.2% BSA。 

③ 下層培養液： 
 
下層培養液采用含 5%－10% FBS 的培養基，具體濃度根據細胞侵襲力而定，侵襲力弱的細 胞可適當提高 FBS 濃度。 
 
④ 細胞培養板：  
常用的細胞培養板有 6 孔板、12 孔板、24 孔板等。細胞培養板沒什么特殊要求，普通的細 胞培養板就可以。但要注意，細胞培養板應當與購買的 Transwell 小室相配套。不要一個大 一個小，不配套啊。 
 
⑤ 細胞計數：  
那么，細胞遷移到下室了，如何計數和比較呢？用 PBS 緩沖液洗細胞 1-2 次,吸盡殘余的液 體，加入甲醇固定 20 分鐘,棄固定液,加入結晶紫染液,染色 10-20 分鐘,棄染色液,用 PBS 沖洗 干凈即可。如下圖所示，哪組遷移的多，哪組遷移的少，是不是一目了然了呢？