細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外，減少細胞內形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細胞內，再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。
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1.配制含的細胞凍存液，預冷（新鮮配制的凍存液會產生大量的熱）；
2.取對數生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；
3.離心；
4.去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中的細胞終濃度；
5.將細胞分裝入凍存管中，每管；
6.在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；
7.凍存：標準的凍存程序為降溫速率，則可迅速放入液氮中。
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1.佩戴眼鏡和手套，從液氮中取出凍存的細胞管。
2.迅速放入水浴中，并不時搖動，在1分鐘內使其完全融化，然后在無菌條件下取出細胞。
3.棄去上清，加入適量培養液混勻后接種于培養瓶中，次日更換一次培養液。
細胞凍存液的注意事項：
1.從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液；
2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3.凍存和復蘇好用新配制的培養液。
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