qPCR熒光定量的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環數的遞增,PCR產物不斷積累,熒光信號也會相應的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監測,實現基因的相對定量、定量和定性分析。
qPCR熒光定量的生產工藝:
產品品質與生產工藝密不可分,先進的制造工藝和高精度設備是產品品質的前提,PCR實驗特別注重PCR材料的管壁厚度,需要超薄且管壁厚度均勻性非常一致,以保證加熱模塊的熱量均勻地傳導給PCR管內樣品,實現實驗結果的準確性。
透光性
由于大多數熒光定量qPCR儀器的特性,光路需要從耗材的頂部傳導到管內參與反應,所以耗材的透光性需要特別的高。
密封性
管蓋跟管體的密封性能需要特別地好,以防止管內樣品的蒸發,避免交叉污染,保證實驗結果的正確無誤!
生產環境
有了精密的設備,潔凈的生產車間也非常重要,如果因為耗材不潔凈造成樣品的污染,實驗結果將非常不準確,排查原因耗時費力,嚴格的生產質控可以確保各批次產品性能的穩定想,保證實驗數據的精確性和可重復性。
qPCR熒光定量具有以下技術優勢:
1.實時監測:通過擴增曲線能夠實時監測PCR產物的積累。
2.特異性強:實驗完成后,溶解曲線的分析可以驗證擴增產物的特異性,降低假陽性。
3.精確定量:利用擴增進入指數增長期的CT值來定量測定起始模板量,從而實現了極為精確的核酸定量檢測。