轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉

染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生

物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；

化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的

技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染

技術。

理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目

前轉染效率zui高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染方法的準備程序復

雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉

染方法，則各有其特點。

需要指出的一點，無論采用哪種轉染技術，要獲得*的轉染結果，可能都需要對轉染條件

進行優化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染

方法的操作細節，都需要考慮。

一、細胞傳代

1. 試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管

架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

2. 棄掉培養皿中的培養基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁，觀察

到細胞完全從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養基終止反應。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞完全分散開。6. 將培養液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養皿。

8. 將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。

9. 將培養皿轉入 CO2培養箱中培養，第二天轉染。

二、細胞轉染

1. 轉染試劑的準備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA 質量)來轉染細胞。在一個轉染管

中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加

入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。

3. 將混合液在室溫放置 10―15 分鐘。

4. 吸去培養板中的培養基，用 PBS 或者無血清培養基清洗一次。

5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

6. 到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養 24－48 小

時。

三、第二次細胞傳代

1. 在轉染后 24 小時，觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。

2. 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度 0.8X105個細胞/35mm 培養皿將細胞重

新轉入培養皿中。

3. 在正常條件下培養 24 小時后按照染色要求條件固定。轉染方法 原理

主要應用 特點

DEAE－

葡聚糖法

帶正電的 DEAE-葡聚糖與核

酸帶負電的磷酸骨架相互作用

形成的復合物被細胞內吞

瞬時轉染

相對簡便、重復比磷酸鈣好，但對

細胞有一定的毒副作用，轉染時需除

血清且一般只用于 BSC-1，CV-1，

COS 細胞系

磷酸鈣法

磷酸鈣 DNA 復合物吸附細胞

膜被細胞內吞

穩定轉染，

染瞬轉染

不適用于原代細胞（所需的 DNA 濃

度較高），操作簡便但重復性差，有

些細胞不適用

細胞建議用 CSCL 梯度離心，轉染是

拷貝數較多

陽離子脂

質體法

帶正電的脂質體與核酸帶負

電的磷酸基團形成復合物，然

后脂質體上剩余的電核與細胞

膜上的唾液酸殘基的負電核結

合；另一種解釋是通過細胞是

內吞作用而被進入細胞。(若

DNA 濃度過高，中和脂質體表

面電核，而降低了與細胞的結

合能力)

穩定轉染，

瞬時轉染，

所有細胞

使用方法簡單，可攜帶大片段

DNA，通用于各種類型的裸露 DNA

或 RNA，能轉染各種類型的細胞，

沒有免疫原性。雖在體外基因轉染中

有很高的效率，但在體內，能被血清

清除，并在肺組織內累積，誘發強烈

的抗炎反應，導致高水平的毒性，這

在很大程度上限制了其應用

陽離子聚

合物

帶正電的聚合物與核酸帶負

電的磷酸基團形成帶正電的復

穩定轉染，

瞬時轉染，

除了具有陽離子脂質體的轉染效

率高，操作簡單，適用范圍廣，重復合物后與細胞表面帶負電的蛋

白多糖相互作用，并通過內吞

作用進入細胞。

所有細胞 性好等特點外，還具有在體內，轉染

效率高，細胞毒性低等特點，是新一

代的轉染試劑。

病

毒

介

導

法

逆轉

錄病

毒

(RNA)

通過病毒中膜糖蛋白和宿主

細胞表面的受體相互作用而進

入宿主細胞，之后反轉入酶啟

動合成 DNA 并隨機整合到宿

主基因組中

穩定轉染，

特定宿主

細胞

可用于難轉染的細胞、原代細胞，

體內細胞等，但攜帶基因不能太大

（<8kb），細胞需處分裂期，需考

慮安全因素

腺病

毒(雙

鏈

DNA)

先和細胞表面的受體結合，繼

而在 αv 整合素介導下被細胞

內吞

瞬時轉染，

特定宿主

細胞

可用于難轉染的細胞，需考慮安全

因素

Biolistic

顆粒傳遞

法 （基因

槍粒子轟

擊法）

將 DNA 用顯微重金屬顆粒沉

淀，再將包被好的顆粒用彈道

裝置投射入細胞，DNA 在胞內

逐步釋放，表達

瞬時性轉

染，穩定轉

染

可用于：人的表皮細胞，纖維原細

胞，淋巴細胞系以及原代細胞

顯微注射

法

用顯微操作將 DNA 直接注入

靶細胞核

穩定轉染，

瞬時轉染

轉染細胞數有限，多用于工程改造

或轉基因動物的胚胎細胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細胞膜電位，

DNA 通過膜上形成的小孔導

穩定轉染，

瞬時轉染，

適用性廣，除了質粒外，還可轉染

大的基因組（>65kb）但細胞致死率入

所有細胞 高，DNA 和細胞用量大， 需根據

不同細胞類型優化電穿孔實驗條件，

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