將收集的各樣品加入等體積的 2×SDS-PAGE Loading Buffer，煮沸裂解 5min，冰浴

2min，12,000rpm 離心 10min，取上清-20℃保存備用。

SDS-PAGE 蛋白質電泳（參照分子克隆實驗指南操作）(薩姆布魯克,2002)

1）按照電泳裝置的使用說明，裝好潔凈干燥的玻璃板。

2）分離膠的制備

按下列成分配制10mL 12%分離膠：

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.5M Tris(pH8.8)

10%SDS

10%過硫酸銨

TEMED

3.3 mL

4.0 mL

2.5 mL

0.1 mL

0.1 mL

0.004 mL

總體積

10 mL

各成分加入后迅速旋渦混勻，用微量移液器將其小心地注入準備好的玻璃板間隙中，

并為積層膠留出足夠空間。輕輕在頂層加入一薄層水封頂，以防止空氣中的氧對凝膠聚合的

抑制作用。凝膠聚合完成后，倒掉覆蓋的水層，用水清洗凝膠頂部數次，用濾紙吸干凝膠頂

端的水。

3）積層膠的制備

按下列成分配制2mL 5%的積層膠：

ddH2O

30%丙烯酰胺混合液

1.4mL

0.33mL1.0M Tris(pH6.8)

10%SDS

10%過硫酸銨

TEMED

0.25mL

0.02mL

0.02mL

0.002mL

總體積

2mL

各成分加入后迅速旋渦混勻，用微量移液器將其灌注到分離膠上，灌滿后小心插入加樣

梳，盡可能避免產生氣泡。

4）待積層膠凝固后，小心拔下梳子。

5）將凝膠固定于電泳裝置上，加入足量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液，在加樣孔中分

別加入20μL各樣品。

6）樣品在積層膠中電泳時，使用80V電壓，待溴酚藍帶進入分離膠后，將電壓升至

120V，繼續電泳直至溴酚藍帶到達分離膠的底部且開始泳出膠底面，關閉電源。

7）卸下凝膠，將其浸泡在至少5倍體積的考馬斯亮藍R-250染色液中，置水平搖床上

室溫染色至少4h，之后取出染色的凝膠并回收染液，以備再用，將凝膠浸泡于考馬斯亮藍

脫色液中，在水平搖床上脫色4~8h，其間更換脫色液3~4次，直至凝膠脫色到條帶清晰為

止，觀察記錄結果并拍照。