羊骨髓間充質干細胞

對羊骨髓間充質干細胞加以誘導分化,并分析其作為組織工程瓣膜種子細胞的可行性,探討體外培養羊骨髓間充質干細胞(BMSCs)和一般細胞生物學的特性。方法:采用成年山羊10只,麻醉后分別于股骨大轉子穿刺抽取羊骨髓標本10ml,采用比重為1.07g/ml的淋巴分離液,接種于無菌的培養瓶中,利用多孔培養板,取第二、三代骨髓間充質干細胞,加入LG-DMEM條件培養基進行體外定向誘導分化。對誘導后培養的骨髓基質的間充質干細胞(MSCs)進行細胞生長測定及形態觀察。結果:培養后的骨髓間充質干細胞和血管間質細胞形態相似,呈梭形或多角型,均24小時內貼壁,3～4天鋪滿瓶底。誘導分化后的骨髓間充質干細胞與血管間質細胞上清液羥脯氨酸含量基本相似,且生長曲線也相同。培養的MSCs粘附貼壁呈紡錘狀,并有多個突起,潛伏期一般為24小時,接種后第8天MSCs生長逐漸緩慢,進入平臺期。結論:誘導分化后所培養的間充質干細胞,具有獨特的增殖和表型特征,是合適的組織工程瓣膜間質種子細胞。

用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；