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PCR熒光定量的原理:以探針法PCR熒光定量為例:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。開始時,探針完整地結合在DNA任意一條單鏈上,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收,檢測不到熒光信號;PCR擴增時,Taq酶將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。傳統的PCR進行檢測...
PCR熒光定量在分子生物學研究中的應用:1、核酸定量分析:對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感,轉基因動植物基因拷貝數的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。2、基因表達差異分析:比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等),特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義,因...
血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體,是血漿去除纖維蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類和維生素、多肽(如生長因子、胰島素、促生長激素)等。血清通常作為補充劑,以2-10%的濃度加入培養基中,為細胞提供綜合營養、激素、生長和附著因子。血清還可作為細胞培養系統的緩沖液,避免各種因素(包括pH變化、蛋白水解活性或重金屬、內毒等)干擾細胞生長或產生毒性作用。HyClone血清是其中一種,它的營養成分比較豐富,用途比較廣,適用于各種癌細胞株,原代細胞,干細胞(胚胎干細胞,...
什么是澳洲血清?它是一款胎牛血清(FBS),血清是自然凝結后剩下的琥珀色血液部分,不含血細胞、纖維蛋白及凝集因子等,含有多種對細胞生長必需的營養因子及大分子物質。通常通過離心進一步精制,以去除殘留的血細胞。胎牛血清(FBS)是通過封閉的采集系統從牛胎兒的血液中提取的血清,用作真核細胞體外細胞培養的生長補充劑。動物血清(牛血清和非牛血清)都用于細胞培養,其中使用最廣泛的是胎牛血清(FBS)。澳洲血清含有生長因子和極低水平的抗體,因此在許多不同的細胞培養應用中具有多功能性。在血清...
serana血清保存方法:1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液...
U937細胞高效率轉染條件分享一、轉染材料準備1.轉染試劑用量:10ul2.DNA/siRNA濃度:電訊3.細胞密度:1*106-1*1054.轉染用培養板:6孔板5.轉染試劑:zetalife,AdvancedDNARNA轉染試劑;貨號:AD6000256.轉染時間:15小時7.細胞培養胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清8.細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。操作過程:1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,...
Thp-1細胞高效率轉染條件分享一、轉染材料準備1.轉染試劑用量:10ul2.siRNA濃度:20um/L3.細胞密度:1*106-1*1054.轉染用培養板:6孔板5.轉染試劑:AdvancedDNARNA轉染試劑;貨號:AD6000256.轉染時間:48小時7.細胞培養胎牛血清:Z7180FBS-500超低內毒素胎牛血清8.細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。操作過程:1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進行...
血源的純凈度決定了產品的質量,穩定的性能是實驗成功的關鍵。900-108Gemini優等胎牛血清指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。900-108Gemini優等胎牛血清中的沉淀主要有纖維蛋白(絮狀沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘連蛋白,磷酸鈣(小黑點),膽固醇等。造成沉淀...
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